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  pEGFP-N1载体           
pEGFP-N1载体
文章来源:不详 更新时间:2008-6-3 0:51:32 本站:学友堂  网址:www.3i3i.cn
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        pEGFP-N1载体为真核细胞表达载体,具有对方面的优点。

       GFP的相关知识:

       绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因来源于Jellyfish Aequorea Victoria, 是Shimomura等于1962年发现的蛋白质,由238个氨基酸组成,分子量约为27Kd。GFPGFP在包括热、极端PH和化学变性剂等苛刻条件下都很稳定,用甲醛固定后会持续发出荧光,但在还原环境下荧光会很快熄灭。

      与以往常用的报告基因相比,GFP具有以下优点:

      ①在荧光显微镜下,用波长约490 nm的紫外线激发后,即可观察到绿色荧光,直接、简捷、便于检测;

      ②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响,保证了极高的检出率;

      ③蛋白本身性质稳定;

      ④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性;

      ⑤其基因片段长度较小(约717 bp),易于构建融合蛋白,且融合蛋白仍能保持荧光激发活性,为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。

       EGFP是一种优化的突变型GFP,使其产生的荧光较普通GFP强35倍,大大增强了其报告基因的敏感度。EGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子,而且其N及C端均可融合,并不影响其发光。

        pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因,如上图质粒图谱所示。

       pEGFP-N1载体具有以下几方面特点:

       ①从结构上看,该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是保证目的基因稳定表达的因素之一;

       ②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV,可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达;

       ③具有多克隆位点,便于目的基因的插入;

       ④该载体具有neo基因,可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。

       这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。



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